AdvanceBio Oligonukleotid-kolonner från Agilent Technologies

Oligonukleotider är korta nukleinsyrasekvenser, oftast 20 baser eller kortare. Terapeutiska oligonukleotider kan skräddarsys för att till exempel stänga av uttrycket av en sjuk gen, medan en frisk kopia av samma gen lämnas opåverkad.

Under de senaste åren har intresset för syntetiska oligonukleotider, inklusive små interfererande RNA, antisens oligonukleotider och aptamerer, snabbt ökat. Med utvecklingen av dessa syntetiska oligonukleotider följer ett behov av robusta analysmetoder och lättanvända arbetsflöden för att karakterisera dem.

Vid forskning och utveckling, liksom QC för terapeutiska oligonukleotider används RP kromatografi med jonpar för identifiering via LC-MS där hög upplösning krävs för att skilja mellan oligonukleotider i full längd och föroreningar. För separation av trityl-off deprotonerade oligonukleotider, krävs robusta kolonner som klarar högt pH och hög temperatur.

AdvanceBio Oligonucleotide är baserad på Poroshell solid core-material för hög effektivitet. Med hjälp av teknik som är exklusiv för Agilent, modifieras partiklarna kemiskt med den robusta kolonnkemin från HPH-C18 för stabilitet vid förhöjda pH-värden och temperaturer, vilket möjliggör användning av optimala mobilfasförhållanden som främjar denatureringsförhållanden för optimal separation. Som ett resultat reduceras sekundära interaktioner, vilket resulterar i smalare toppar och därmed hög effektivitet. Dessutom har ett applikationsspecifikt QC-test för oligonukleotider tagits fram för att säkerställa prestanda och upplösning.

Vid processutveckling och småskalig upprening används vanligen samma kolonnkemi som identifierats och optimerats under utvecklingen av analytiska metoder även till preparativa metoder. Detta kräver att kolonnerna är skalbara till semi-preparativa och preparativa dimensioner, med samma retention och selektivitet som vid analytiska.

AdvanceBio Oligonucleotide finns som 2.7µm och 4µm solid core-partiklar, i analytiska dimensioner, och fullt skalbara med samma kolonnkemi till 10mm semi-preparativa och 21.2mm preparativa kolonner.

Jonpars-kromatografi med Reversed Phase (IP-RP)
Ion-Pair Reversed-Phase (IP-RP) är en analytisk teknik för att få retention och separera laddade molekyler som normalt inte har retention i RP. Med oligonukleotider, som är polära med en anjonisk ryggrad, underlättar införandet av en alkylamin som jon-par för interaktion med en C18 stationär fas. Den positivt laddade kvävegruppen skapar ett jonpar med oligonukleotidens anjoniska ryggrad. Aminens alkylkedja hålls kvar av den stationära hydrofoba C18-fasen, vilket skapar retention och separation för oligon.

>> Superficially Porous Columns for Semi-Preparative Purification of Synthetic Oligonucleotides.pdf
>> Fast and High-Resolution Reversed-Phase Separation of Synthetic Oligonucleotides.pdf
>> Direct Analysis of In-Process Oligonucleotides Without Manual Purification.pdf
>> Maximize Your Resources and Simplify Scale-up with AdvanceBio Oligonucleotide Columns.pdf