Processmaterial för Hydrofobisk Interaktionskromatografi (HIC) - Tosoh Bioscience
Hydrofobisk interaktionskromatografi (HIC) är ett kraftfullt verktyg för upprening av biomolekyler i process. Tekniken utnyttjar hydrofob interaktion mellan de hydrofoba regionerna på proteinets yta och en svagt hydrofob stationär fas.
Proteiner och andra molekyler med hydrofoba ytor interagerar med de hydrofoba liganderna på HIC-stationärfasen/gelen i en vattenbaserad mobilfas med hög salthalt. Proteiner elueras därefter genom att saltkoncentrationen minskas. I de flesta fall eluerar proteinet vid låg salthalt eller helt utan salt. Eftersom HIC-separationer sker vid milda elueringsförhållanden, bibehåller proteinet dess biologiska aktivitet.
Applikationer
HIC är ett utmärkt komplement till jonbyte och storleksfördelning särskilt när proteinerna finns som sina isomera former. Selektivitetsskillnaderna som utnyttjas vid HIC kan även användas efter separation med affinitetskromatografi, där lika proteiner inte särskilts av affinitetsliganden.
Tosohs breda sortiment av porstorlekar och partikelstorlekar av Toyopearl HIC erbjuder möjligheter att välja det material med högsta bindnings kapacitet och selektivitet för respektive applikation
Monoklonala antikroppar
I sortimentet finns HIC-material baserade på Toyopearl HW-60 som har en porstorlek på 750Å vilket är optimalt för monoklonala antikroppar (MAb). Det finns tre olika HIC material baserade på HW-60 med olika ligander, Polypropylen glykol (PPG), Phenyl, och Butyl.
Felveckade proteiner
Felveckade proteiner är generellt sett mer hydrofoba än nativa proteiner, Toyopearl Butyl-650M används frekvent för att avskilja de felveckade från de nativa.
Glykoproteiner
Toyopearl HIC material kan även användas för upprening av glykoproteiner, som ofta riskerar att binda irreversibelt till sackarid-baserade kromatografi material.
>> Video - Hydrophobic Interaction Chromatography
>> Process Media Catalog.pdf
>> MiniChrom Columns.pdf
>> RoboColumns.pdf
>> Toyopearl Instruction Manual.pdf
>> Bioprocessing Application Notebook - Online
TOYOPEARL och TSKgel HIC
TOYOPEARL HIC-material är funktionaliserade versioner av TOYOPEARL HW SEC-materialen och är därför baserade på hydroxylerad-polymetakrylat partiklar.
Tosoh Bioscience erbjuder fem olika HIC-ligander med olika grader av hydrofobicitet. Hydrofobiciteten på HIC-materialet ökar genom ligandserien; Ether, PPG (polypropylenglykol), Phenyl, Butyl och Hexyl.
Ether HIC Resins
TOYOPEARL Ether-650 och TSKgel Ether-5PW är de mest hydrofila HIC-materialen, de med lägst hydrofobicitet i Tosoh Bioscience sortiment. TOYOPEARL Ether-650 och TSKgel Ether-5PW är polymetakrylat-baserade material med porositeten 100nm (1000Å) och med etergrupper som ligander.
Etherliganden är användbar för mycket hydrofoba molekyler, såsom membranproteiner. TOYOPEARL Ether-650 finns i tre partikelstorlekar, 35 μm(S-grad), 65 μm (M-grad) och 100 μm (C-grad). För separation med högre prestanda välj TSKgel Ether-5PW som finns i partikelstorlekarna 20µm och 30µm.
TOYOPEARL Ether-650 och TSKgel Ether-5PW har samma selektivitet.
PPG HIC Resins
TOYOPEARL PPG-600M (polypropylenglykol) har näst lägst hydrofobicitet av Tosoh Bioscience HIC-material. Toyopearl PPG-600M har optimerats för upprening av monoklonala antikroppar och har mycket hög kapacitet och utbyte för dessa.
TOYOPEARL PPG är ett polymetakrylatbaserat material med en porositet på 75 nm (750 Å) och polypropylenglykolgrupper som ligander.
Phenyl HIC Resins
TOYOPEARL och TSKgel Phenyl ligger i mitten av hydofobicitetsskalan bland Tosoh Biosciences fem HIC-material. Phenyl materialet rekommenderas för separation av proteiner, deras isoformer och för upprening från aggregat.
TOYOPEARL Phenyl-650 är ett 100 nm (1000 Å) polymetakrylatbaserat material med fenylgrupper som ligander. TOYOPEARL Phenyl-650 finns i tre olika partikelstorlekar; S(35µm), M(65µm) och C(100µm).
För separation med hög upplösning rekommenderas TSKgel Phenyl-5PW som har mindre partikelstorlek (20 & 30µm). TOYOPEARL Phenyl-650 och TSKgel Phenyl-5PW har samma selektivitet.
TOYOPEARL Phenyl-600Ms porstorlek är optimerad för upprening av monoklonala antikroppar. Hydrofobiciteten för Phenyl-600M är i mitten av hydrofobicitetsskalan bland Tosoh Biosciences HIC-material, något mera hydrofob än Toyopearl Phenyl-650M och med en större porositet (1000Å) jämfört med Phenyl-650M (750Å).
TOYOPEARL-Phenyl-600M används vanligtvis för upprenings- eller poleringssteg i processen. Phenyl-600M har ett mycket högt utbyte och hög dynamisk kapacitet för både stora och små proteiner.
För andra produkter som är optimerade för monoklonala antikroppar (mAbs), se TOYOPEARL PPG-600 och TOYOPEARL Butyl-600.
TSKgel Phenyl-5PW är baserat på ett 100 nm (1000 Å), tvärbundet polymetakrylatmaterial med fenylgrupper som ligander. TSKgel Phenyl-5PW är pH stabilt och tål sura och alkaliska tvättar. Phenyl-5PW har utmärkt tillgänglighet för stora molekyler med låg diffusionskoefficient.
TSKgel Phenyl-5PW är det bästa valet för separation av proteiner med låg hydofobicitet.
Butyl HIC Resins
TOYOPEARL Butyl är det material med näst högst hydrofobicitet bland Tosoh Biosciences HIC-material. Det finns 3st olika porstorlekar och vardera har optimerats för en specifik molekylstorleksprofil. De primära användningsområdena för TOYOPEARL Butyl är separation av proteiner, deras isoformer och upprening från aggregat.
Följande Butyl HIC-hartser finns i Tosoh Bioscience sortiment:
TOYOPEARL Butyl-650 är baserat på ett 100 nm (1000 Å) polymetakrylatmaterial med C4-grupper som ligander. Butyl-650 har störst porstorlek av de tre olika Butyl materialen. Butyl-650 är lämplig för separation av proteiner, deras isoformer och upprening från aggregat. TOYOPEARL Butyl-650 finns i tre olika partikelstorlekar, 35 μm (S-grad), 65 μm (M-grad) och 100 μm (C-grad).
TOYOPEARL Butyl-600M är baserat på ett 75 nm (750 Å) polymetakrylatmaterial med C4-grupper som ligander. Porstorleken hos Butyl-600M har optimerats för upprening av monoklonala antikroppar.
TOYOPEARL SuperButyl-550C är baserat på ett 50 nm (500 Å) polymetakrylatmaterial med C4-grupper som ligand. SuperButyl-550C har den minsta porstorleken av Tosohs tre Butyl-material. TOYOPEARL SuperButyl-550C är utvecklad för separation av mindre proteiner.
>> Toyopearl SuperButyl-550C.pdf
Hexyl HIC Resins
TOYOPEARL Hexyl-650 är Tosoh Biosciences mest hydrofoba HIC-material. Hexyl-650 är baserat på ett 100nm (1000Å) polymetakrylatmaterial med C6-grupper som ligand. Toyopearl Hexyl-650 används för mer polära proteiner eller där elueringen måste ske vid låg salthalt.
TOYOPEARL Hexyl-650 finns i tre olika partikelstorlekar, S (35µm), M (65µm) och C (100µm).
